1. Langkah pertama yang harus kalian lakukan adalah punya software PerlPrimer. Bisa di download di http://perlprimer.sourceforge.net/download.html
2. Silahkan install software PerlPrimer di komputermu, seperti kalian biasa menginstal software lainnya.
3. Buka software PerlPrimer yang teah terinstal. Berikut penampakannya
4. Cari CDS (Code DNA Sequence) di website ncbi. Pada kali ini digunakan gen urea H. pylori, di http://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/14583072?report=fasta yang memiliki panjang 717 pasangan basa
ATGAAACTCACCCCAAAAGAGTTAGATAAGTTGATGCTCCACTATGCTGGAGAATTGGCTAGGAAACGCA AAGAAAAAGGCATTAAGCTTAACTATGTGGAAGCAGTAGCTTTGATTAGTGCCCATATTATGGAAGAAGC GAGAGCTGGTAAGAAAAGTGCGGCTGAATTGATGCAAGAAGGGCGCACTCTTTTAAAACCTGATGATGTG ATGGATGGCGTGGCAAGCATGATCCATGAAGTGGGTATTGAAGCGATGTTTCCTGATGGGACCAAACTCG TAACCGTGCATACCCCTATTGAGGCTAATGGTAAATTAGTTCCTGGTGAGTTGTTCTTAAAAAATGAAGA CATCACTATCAACGAAGGCAAAAAAGCCGTTAGCGTGAAAGTTAAAAATGTTGGCGACAGACCGGTTCAA ATCGGCTCACACTTCCATTTCTTTGAAGTGAATAGATACTTAGACTTTGACAGAGAAAAAACTTTCGGCA AACGCTTGGATATTGCGAGCGGGACAGCAGTAAGGTTTGAACCTGGCGAAGAAAAATCTGTAGAATTGAT TGACATCGGCGGCAACAGAAGAATCTTTGGATTTAACGCATTGGTTGATAGGCAAGCAGATAACGAAAGC AAAAAAATTGCTTTACACAGAGCTAAAGAGCGTGGTTTTCATGGCGCTAAAAGCGATGACAACTATGTAA AAACAATTAAGGAGTAA5. Copy dan Paste sekuens tersebut di kolom Sequence Kalian bisa atur Primer Tm (titik leleh) di default, Primer Length (Panjang Primer) default pada 20-24, Amplified range, pada 5' 1-100 dan 3' 600-717. Klik tombol Find Primer
6. Double Klik salah satu hasil primer. Akan muncul halaman baru di tab Primer dengan hasil Primer Dimer
7. Hasil yang baik adalah apabila tidak terbentuk ikatan sesama primer, baik antar Primer Forward dan Reverse, Forward dengan Forward, ataupun Reverse dengan Reverse. Ikatan ditandai dengan garis |
antara primer
8. Untuk memastikan spesifitas kode gen bakteri yang kita deteksi, klik BLAST primer. Atau, bisa juga buka di situs ncbi, http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi
9. Pada tutorial ini, kami melakukan langkah ke-2, yaitu melalui situs ncbi. Pada halaman yang muncul, pilih nucleotide blast
10. Masukkan sequence Primer Forward pada kotak yang tersedia, klik BLAST
11. Apabila pada list di bawah terdaftar bakteri kita, menandakan bahwa gen bakteri kita sesuai dengan harapan.